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本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對腦利鈉肽/氨基末端腦利鈉肽前體檢測試劑注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門對注冊申報資料的技術(shù)審評提供參考。

本指導(dǎo)原則是對腦利鈉肽/氨基末端腦利鈉肽前體檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。

本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標準體系及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)、標準體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。

一、適用范圍

腦利鈉肽檢測試劑是指利用抗原抗體反應(yīng)的免疫學(xué)方法對人血漿、全血中的腦利鈉肽（BNP）進行體外定量檢測的試劑。

氨基末端腦利鈉肽前體檢測試劑是指利用抗原抗體反應(yīng)的免疫學(xué)方法對人血漿、全血、血清中的氨基末端腦利鈉肽前體（NT-proBNP）進行體外定量檢測的試劑。

本指導(dǎo)原則適用于以酶標記、（電）化學(xué)發(fā)光標記、（時間分辨）熒光標記等標記方法，以微孔板、管、磁顆粒、微珠和塑料珠等為載體的定量檢測BNP/ NT-proBNP的免疫分析試劑，不適用于以各類膠體金標記的檢測試紙和以¹²⁵I等放射性同位素標記的各類放射免疫或免疫放射試劑。

根據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）、《體外診斷試劑注冊管理辦法修正案》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第30號）和《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2013〕242號），腦利鈉肽/氨基末端腦利鈉肽前體檢測試劑管理類別為Ⅱ類，分類編碼為6840。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

腦利鈉肽（BNP）是一種與心房鈉尿肽（ANP）功能類似的神經(jīng)激素類物質(zhì)，具有促尿排鈉并抵制交感神經(jīng)活性的作用，與心房鈉尿肽組織在學(xué)分布及氨基酸組成等方面卻存在著較大差異，故被作為另一種物質(zhì)，命名為BNP。

一系列研究發(fā)現(xiàn)：人體內(nèi)的 BNP 是由 BNP 氨基酸前體蛋白（proBNP）的 C 端裂解得到，而其N端則裂解形成僅有76個氨基酸的NT-proBNP即氨基末端腦利鈉肽前體。

BNP及NT-proBNP的基因差異很大，主要表現(xiàn)在兩者在體內(nèi)的清除途徑、半衰期等存在明顯的差異。

BNP及NT-proBNP在體內(nèi)主要通過肝腎清除。BNP的消除主要通過三種方式：一是與利鈉肽受體C在受體介導(dǎo)下相互結(jié)合后被清除；二是被中性肽鏈內(nèi)切酶切割而清除；三是通過被動排泄被體內(nèi)的腎臟排泄清除。而相對于BNP來說NT-proBNP 在體內(nèi)并無上述前兩種主動清除機制，僅能被限制在高血流量的器官內(nèi)，通過腎小球濾過的形式被動清除，因此在體內(nèi)存留時間更長，更易于檢測。

BNP及NT-proBNP 生物活性也不同。BNP 因具有一個特征性的氨基酸環(huán)，具有重要的生物活性，但在體內(nèi)的半衰期較短，僅有18—22分鐘；而 NT-proBNP 為直線形結(jié)構(gòu)，無生物活性，在體內(nèi)半衰期較長，約120分鐘，且存在量不受體位及日?；顒拥纫蛩氐挠绊懀糠€(wěn)定。

由于BNP和NT-proBNP 主要是由左心室心肌細胞合成，在體內(nèi)等摩爾數(shù)產(chǎn)生后分泌進入血液，兩者都可以作為一種有效的心衰標志物，可單獨地預(yù)示心室壓力增高狀況，對于充血性心力衰竭及其引發(fā)的呼吸困難并發(fā)癥，原發(fā)性高血壓及其評價左心室功能障礙等心血管相關(guān)疾病的輔助診斷及治療評估監(jiān)測具有重要價值。

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)、檢出限、線性范圍、準確度、參考區(qū)間及臨床適用范圍等方面寫明擬申報產(chǎn)品與目前市場上已獲批準的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。綜述資料作為注冊申報資料的重要組分之一，其內(nèi)容應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）的相關(guān)要求。

申請人提交的材料應(yīng)至少包含以下幾方面內(nèi)容：

1．腦利鈉肽/氨基末端腦利鈉肽前體的生物學(xué)特征、結(jié)構(gòu)與功能、在體內(nèi)正常和病理狀態(tài)下的代謝途徑和存在形式。

2.腦利鈉肽/氨基末端腦利鈉肽前體檢測所適用的疾病情況、腦利鈉肽與心功能分級的相關(guān)情況。

（二）主要原材料研究資料（如需要提供）

應(yīng)提供主要原材料如抗體、標記物、固相載體、校準品、質(zhì)控品（如適用）等的選擇、制備及其質(zhì)量標準等的研究資料。如主要原材料為企業(yè)自己生產(chǎn)，其生產(chǎn)工藝應(yīng)穩(wěn)定；如主要原材料源于外購，應(yīng)提供的資料包括：選擇該原材料的依據(jù)及篩選試驗資料、供貨方提供的質(zhì)量標準、出廠檢驗報告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗資料。

主要原材料的研究資料具體要求如下：

1. 腦利鈉肽/氨基末端腦利鈉肽前體檢測試劑主要原材料的研究資料應(yīng)包括以下內(nèi)容。

NT-proBNP單克隆抗體的分析研究應(yīng)包括：抗體純度、抗體特異性等內(nèi)容。

BNP單克隆抗體的分析研究應(yīng)包括：抗體純度、抗體特異性等內(nèi)容。且由于BNP分子量約3.5kDa，蛋白分子較小，是半抗原，沒有免疫原性，不能直接免疫小鼠制備抗體，在制備該抗體時應(yīng)充分考慮以上問題。

2.校準品和質(zhì)控品（如有）的原料選擇、制備、定值過程及試驗資料，校準品的溯源性文件。

3.申請人應(yīng)根據(jù)GB/T 21415—2008/ISO 17511:2003《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量 校準品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》提供所用校準品的來源、賦值過程和相應(yīng)指標、以及不確定度等內(nèi)容。明確校準品的質(zhì)量標準并提供校準品的溯源性文件。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料（如需要提供）

應(yīng)包括以下內(nèi)容（以下內(nèi)容可根據(jù)具體的方法學(xué)特點進行編寫）：

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可以流程圖方式表示，并標明關(guān)鍵工藝質(zhì)控步驟，簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

2.產(chǎn)品反應(yīng)原理介紹。

3.抗體包被工藝研究：申請人應(yīng)考慮如包被緩沖液種類及添加量、濃度、包被時間、干燥溫度及時間（如適用）等指標對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述指標的最佳組合。

4.反應(yīng)條件確定：申請人應(yīng)考慮反應(yīng)模式、反應(yīng)時間、反應(yīng)溫度、洗滌次數(shù)（如適用）等條件對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述條件的最佳組合。

5.不同適用機型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述。

6.體系中樣本及試劑的加樣方式及添加量確定：申請人應(yīng)考慮樣本加樣方式、加樣量以及試劑添加順序、添加量對產(chǎn)品檢測結(jié)果的影響，通過實驗確定最佳的樣本及試劑的添加方式和添加量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進行處理后方可用于最終檢測，申請人還應(yīng)對可用于樣本稀釋的基質(zhì)或處理方法進行研究（如適用），通過試驗確定樣本稀釋基質(zhì)或處理方法。確定反應(yīng)所需其他試劑用量（標準品、標記物、底物等）的研究資料。

7.固相載體、信號放大系統(tǒng)、顯色（發(fā)光）系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹及研究資料。

（四）分析性能評估資料

申請人應(yīng)提交產(chǎn)品研制階段對試劑進行的所有性能驗證的研究資料，對于每項分析性能的評價都應(yīng)包括具體研究方法、可接受標準、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計分析等詳細資料。有關(guān)分析性能驗證的背景信息也應(yīng)在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗地點、適用儀器、試劑規(guī)格、批號、樣本來源等。建議選擇多批產(chǎn)品對以下分析性能進行研究，性能評估時應(yīng)將試劑和所選用的校準品、質(zhì)控品作為一個整體進行評價，評估整個系統(tǒng)的性能是否符合要求。具體研究方法建議參照相關(guān)國際或國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進行。

1. 檢出限

檢出限的確定方法可參考國際或國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件，申請人應(yīng)提供空白限的確定方法。

檢出限驗證方法：

對5份濃度近似空白限（LOD）的低值樣本進行檢測，每份樣本檢測5次，對檢測結(jié)果按照大小進行排序，符合如下條件，即可認為所提供的空白限和檢出限的設(shè)置基本合理。

1.1低于所提供的空白限數(shù)值的檢測結(jié)果的數(shù)量應(yīng)小于等于3個；

1.2適用時，無高于所提供的參考區(qū)間下限的檢測結(jié)果。

2.準確度

對測量準確度的評價方法依次包括：相對偏差、比對試驗、回收試驗等方法，因該項目目前尚無相應(yīng)的國家（國際）標準品，建議申請人優(yōu)先采用回收試驗的方法，申請人也可根據(jù)實際情況選擇其他合理方法進行研究。

2.1相對偏差

2.1.1用可用于評價常規(guī)方法的有證參考物質(zhì)（CRM）或其他公認的參考物質(zhì)作為樣本進行檢測，根據(jù)申請人提供的試劑盒線性區(qū)間，將能用于評價常規(guī)方法的參考物質(zhì)作為樣本，合理設(shè)置2—3個濃度，按照待測試劑盒說明書的步驟進行檢測，每個樣本重復(fù)測定3次，測試結(jié)果記為（X_i），按公式（1）分別計算相對偏差（B_i），如果3次結(jié)果都符合要求，即判為合格。如果大于等于2次的結(jié)果不符合，即判為不合格。如果有1次結(jié)果不符合要求，則應(yīng)重新連續(xù)測試20次，并分別按照公式（1）計算相對偏差，如果大于等于19次測試的結(jié)果符合的要求，即判為合格。

  ……………………（1）

式中：

B_i—相對偏差；

X_i—測量濃度；

T—標定濃度。

2.1.2企業(yè)參考品測試

由申請人提供企業(yè)參考品，按照常規(guī)樣本進行檢測，每份樣本測定3次，測試結(jié)果記為（X_i），按公式（1）分別計算相對偏差（B_i）。

2.2比對試驗

取不少于40個合理分布在線性區(qū)間內(nèi)不同濃度的人體樣本，與指定的分析系統(tǒng)進行比對試驗。每個樣本按待測試劑盒及選定分析系統(tǒng)的要求分別進行檢測，每個樣本測定1遍，用線性回歸方法對兩組結(jié)果進行線性擬合，得到線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)（r）和斜率。計算各個樣本的待測試劑盒測定值與對照系統(tǒng)測定值的絕對偏差或相對偏差。

注：如樣本不穩(wěn)定，一份樣本宜在兩個系統(tǒng)同時進行檢測。

2.3回收實驗

選擇合適濃度的常規(guī)檢測樣本，分為體積相同的3—4份。在其中2—3份樣本中加入不同濃度相同體積的待測物標準液或純品制備待回收分析樣本，加入體積小于原體積的10%，制成2—3個不同加入濃度的待回收分析樣本，計算加入的待測物的濃度。在另一份樣本中加入同樣體積的無待測物的溶劑，制成基礎(chǔ)樣本。用待評價系統(tǒng)分別重復(fù)測定待回收分析樣本和基礎(chǔ)樣本3次，計算回收率。

2.3.1加入濃度n=標準液濃度n×[標準液加入體積/（樣本體積+標準液體積）]

2.3.2計算回收率：

回收率_n =

2.3.3計算平均回收率：

平均回收率 =

2.3.4計算每個樣本回收率與平均回收率的差值：

每個樣本回收率與平均回收率的差值＝回收率_n－平均回收率

如差值超過±10%，應(yīng)查找原因并糾正，重新進行評估。

2.3.5計算比例系統(tǒng)誤差：

比例系統(tǒng)誤差 = |100%－平均回收率|

2.3.6結(jié)果評估：

結(jié)果應(yīng)滿足預(yù)期值，同時滿足臨床需求。

2.3.7回收試驗注意事項：

2.3.7.1加入的待測物標準液體積一般在樣本體積的10%以內(nèi)，如果高濃度的待測物標準液不易得到， 加入體積亦不得超過原樣本體積的20%。

加入的待測物標準液體積量不應(yīng)影響樣本基質(zhì)；并且保證在加樣過程中的取樣準確度。

2.3.7.2加入的溶劑應(yīng)不影響對待測物的測定。

2.3.7.3保證總濃度在系統(tǒng)分析測量范圍內(nèi)，盡量使加入標準液后樣本中的被測物濃度達到醫(yī)學(xué)決定水平。

2.3.7.4因待測物標準液溶液加入體積不到10%，為保證得到不同濃度的待回收分析樣本，標準液的濃度應(yīng)該足夠高。

3.線性范圍

線性范圍的建立方法可參考國際國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進行，建立方法簡述如下：

建立試劑線性范圍所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實際檢測的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測定上限的混合樣本，且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對樣本基質(zhì)的影響。建立一種定量測定方法的線性范圍時，需在預(yù)期測定范圍內(nèi)選擇7—11個濃度水平，每個濃度水平重復(fù)測定2—4次。如申請人希望有更多的測量點（比預(yù)期的線性范圍寬20%—30%），這樣能檢測到“拐點”，然后依據(jù)實驗結(jié)果逐漸減少數(shù)據(jù)點直至表現(xiàn)出線性關(guān)系，可發(fā)現(xiàn)最寬的線性范圍。

驗證線性范圍時可選擇5—7個濃度水平，將接近線性區(qū)間上限的高值樣本按一定比例稀釋為至少5個濃度，其中低值濃度的樣本須接近線性區(qū)間的下限。對每一濃度的樣本至少重復(fù)測定2次，計算其平均值，將測定濃度的平均值與理論濃度或稀釋比例用最小二乘法進行直線擬合，并計算線性相關(guān)系數(shù)r。  

4.精密度

精密度的評價方法可根據(jù)不同產(chǎn)品特征或申請人的研究習(xí)慣進行，但必須保證研究的科學(xué)合理性，具體實驗方法可以參考國際或國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進行。申請人應(yīng)對每項精密度指標的評價標準做出合理要求，如標準差或變異系數(shù)的范圍等。

針對本類產(chǎn)品的精密度評價主要包括以下要求：

4.1質(zhì)控品的選取：精密度的評估應(yīng)使用2—3個濃度水平的質(zhì)控品進行測定，質(zhì)控品濃度包括醫(yī)學(xué)決定水平（Cut-off值）附近的濃度值和中高濃度值。

4.2批內(nèi)不精密度：用同一批號試劑盒，對不同濃度的質(zhì)控品分別重復(fù)測定10次，計算10次測定結(jié)果的平均值（）和標準差（S），根據(jù)公式（2）得出變異系數(shù)（CV）。

CV=S/×100% ……………………（2）

式中：

CV—變異系數(shù)；

S—10次測量結(jié)果的標準差；

— 10次測量結(jié)果的平均值。

批間不精密度：用三個不同批號試劑盒，對不同濃度的質(zhì)控品分別重復(fù)測定10次，計算每個濃度樣本30次測量結(jié)果的平均值（）和標準差（S），根據(jù)公式（3）得出變異系數(shù)（CV）。

      CV=S/×100% ……………………（3）

式中：

CV—變異系數(shù)；

S—30次測量結(jié)果的標準差；

— 30次測量結(jié)果的平均值。

注：可參考國際或國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件相關(guān)要求選取適宜的方法進行試驗。

5.分析特異性

5.1交叉反應(yīng)

易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其他抗原、抗體等的驗證情況，應(yīng)至少包括結(jié)構(gòu)類似物ANP、CNP、血管緊張素、腎上腺素作為腦利鈉肽（BNP）/氨基末端腦利鈉肽前體（NT-proBNP）檢測試劑交叉反應(yīng)驗證的物質(zhì)。交叉反應(yīng)驗證物質(zhì)的濃度分布應(yīng)覆蓋人體生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質(zhì)濃度。

5.2干擾物質(zhì)

潛在的干擾物質(zhì)主要包括（以下結(jié)果應(yīng)量化表示，禁用輕度、嚴重的模糊表述）：

5.2.1內(nèi)源性干擾

應(yīng)明確已知干擾因素對測定結(jié)果的影響：可采用回收實驗（如適用）對不同濃度的血紅蛋白、膽紅素、甘油三酯、類風(fēng)濕因子、嗜異性抗體對檢測結(jié)果的影響進行評價，干擾物濃度的分布應(yīng)覆蓋人體生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質(zhì)濃度，待評價的BNP/NT-proBNP樣本濃度至少應(yīng)包含生理、病理2個水平，選取線性范圍內(nèi)有臨床代表性意義的濃度。

5.2.2樣本添加劑的干擾

如果試劑盒適用樣本類型包括血漿/全血樣本，應(yīng)對各種適用抗凝劑進行檢測，如EDTA、枸櫞酸鈉、肝素等。方法為對腦利鈉肽（BNP）/氨基末端腦利鈉肽前體（NT-proBNP）檢測試劑檢測陰性、弱陽性（臨界濃度）的臨床或模擬添加樣本分別進行驗證，樣本量選擇應(yīng)體現(xiàn)一定的統(tǒng)計學(xué)意義，說明樣本的制備方法及干擾實驗的評價標準，確定可接受的干擾物質(zhì)極限濃度。

5.2.3處方及非處方藥的干擾

所選取的藥物可包含治療心衰的常用藥，如：利尿劑、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑（ACEI）/血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑（ARB）、β受體阻滯劑、醛固酮受體拮抗劑和血管緊張素受體腦啡肽酶抑制劑（ARNi）。藥物干擾的研究可根據(jù)需要由申請人選擇何種藥物進行研究，藥物濃度應(yīng)結(jié)合臨床實際用藥情況。

6.校準品及質(zhì)控品（如適用）

參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》的要求，提供企業(yè)（工作）校準品及試劑盒配套校準品的溯源、賦值過程以及測量不確定度相關(guān)資料，提供質(zhì)控品賦值及其靶值范圍確定的相關(guān)資料。同時，應(yīng)對校準品、質(zhì)控品的賦值結(jié)果的瓶內(nèi)均勻性、瓶間均勻性以及其賦值結(jié)果的準確度進行評價。如校準品或質(zhì)控品的基質(zhì)不同于臨床常用樣本類型，還應(yīng)提交基質(zhì)效應(yīng)的相關(guān)研究資料。

7.鉤狀（Hook）效應(yīng)（如適用）：說明不會產(chǎn)生Hook效應(yīng)的濃度上限或相關(guān)研究，如需稀釋，應(yīng)注明對稀釋液的要求、最佳或最大稀釋比例。每個濃度重復(fù)3份，對鉤狀效應(yīng)進行合理的驗證。建議在產(chǎn)品說明書上明示對鉤狀效應(yīng)的研究結(jié)果。

8.其他需注意問題

對于適用多個機型的產(chǎn)品，應(yīng)提供產(chǎn)品說明書【適用儀器】項中所列的所有型號儀器的性能評估資料。如產(chǎn)品涉及不同包裝規(guī)格，則需要提供每個包裝規(guī)格在不同型號儀器上的評估資料；如不同的包裝規(guī)格產(chǎn)品間存在性能差異，需要提交采用每個包裝規(guī)格產(chǎn)品進行的上述項目評估的試驗資料及總結(jié)。如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的詳細說明，具體說明不同包裝規(guī)格之間的差別及可能產(chǎn)生的影響。

試劑盒的測試樣本類型如包括血清和血漿樣本，則應(yīng)對二者進行相關(guān)性研究以確認二者檢測結(jié)果是否完全一致或存在某種相關(guān)性（如系數(shù)關(guān)系）。試劑盒的測試樣本類型如包括血漿和全血樣本，則應(yīng)對二者進行相關(guān)性研究以確認二者檢測結(jié)果是否完全一致或存在某種相關(guān)性（如系數(shù)關(guān)系）。

（五）參考區(qū)間確定資料

應(yīng)提交建立參考區(qū)間所采用樣本來源及詳細的試驗資料。應(yīng)明確參考人群的篩選標準，研究各組（如性別、年齡等）例數(shù)應(yīng)符合統(tǒng)計學(xué)要求。建議參考國際或國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品參考區(qū)間確定的文件。

若引用BNP/NT-proBNP臨床應(yīng)用的專家共識或其他針對中國人群參考區(qū)間研究的相關(guān)文獻，應(yīng)明確說明出處，并進行驗證。驗證樣本應(yīng)不少于120例，樣本來源應(yīng)至少考慮不同年齡、性別因素，盡可能考慮樣本來源的多樣性、代表性。研究結(jié)果應(yīng)在說明書【參考區(qū)間】項中進行相應(yīng)說明。

BNP在人體內(nèi)的半衰期為22分鐘，體外室溫下穩(wěn)定性為2—8小時，而NT-proBNP在人體內(nèi)的半衰期為120分鐘，體外室溫下穩(wěn)定性為大于72小時。在研究過程中應(yīng)根據(jù)以上兩種物質(zhì)特點，對分析前應(yīng)考慮的兩個因素予以考慮，即生物學(xué)因素和方法學(xué)因素。生物學(xué)因素包括代謝和血液動力學(xué)，方法學(xué)因素包括樣本收集和處置等。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。

試劑的穩(wěn)定性主要包括實時穩(wěn)定性研究，以及試劑開瓶穩(wěn)定性（如適用）、復(fù)溶穩(wěn)定性（如適用）、運輸穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制（如適用）等研究，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

適用樣本的穩(wěn)定性主要包括室溫（10—30℃）保存、冷藏（2—8℃）和冷凍（－20℃）條件下的有效性驗證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段對儲存樣本進行穩(wěn)定性驗證，從而確認不同類型樣本的保存穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進行評價。

由于各企業(yè)的原料選擇、工藝過程的不同，BNP在體外室溫穩(wěn)定性也不盡相同，應(yīng)提交相關(guān)研究資料。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中分別進行詳細說明。

（七）臨床評價資料

此項目已經(jīng)列入《關(guān)于新修訂免于進行臨床試驗醫(yī)療器械目錄的通告》（國家藥品監(jiān)督管理局通告2018年第94號）中免于進行臨床試驗的體外診斷試劑目錄。根據(jù)體外診斷試劑臨床評價的相關(guān)要求，申請人可按照《免于進行臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價資料基本要求（試行）》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2017年第179號）要求進行臨床評價。如無法按要求進行臨床評價，應(yīng)進行臨床試驗。

1.臨床評價途徑

臨床評價的開展、臨床評估方案的制定以及臨床評價報告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《免于進行臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價資料基本要求（試行）》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2017年第179號）的要求。下面僅對臨床評價中的基本問題進行闡述。

1.1臨床評價途徑的選擇

申請人應(yīng)當根據(jù)申報產(chǎn)品的具體情況建立適應(yīng)的評價方法，充分考慮產(chǎn)品的預(yù)期用途，開展具有針對性的評價研究，可以選擇以下兩種評價途徑之一。

1.1.1與境內(nèi)已上市同類產(chǎn)品進行比較研究試驗，證明兩者具有等效性。應(yīng)選擇目前臨床普遍認為質(zhì)量較好的產(chǎn)品作為對比試劑，同時應(yīng)充分了解對比試劑的技術(shù)信息，包括方法學(xué)、臨床預(yù)期用途、主要性能指標、校準品的溯源情況、推薦的參考區(qū)間等。應(yīng)盡量選擇方法學(xué)相同，線性范圍、精密度、參考區(qū)間等性能接近的同類產(chǎn)品作為對比試劑，如方法學(xué)不同，則應(yīng)首選方法學(xué)性能較高的對比試劑進行試驗。應(yīng)提供已上市產(chǎn)品的境內(nèi)注冊信息及說明書。

1.1.2與參考方法進行比較研究試驗，考察待評價試劑與參考方法的符合率/一致性。

1.2檢測地點的選擇及要求

1.2.1申請人可根據(jù)產(chǎn)品特點自行選擇試驗地點完成樣本檢測，檢測地點的設(shè)施、試驗設(shè)備、環(huán)境等應(yīng)能夠滿足產(chǎn)品檢測要求。

1.2.2如選擇與參考方法進行比較研究試驗，應(yīng)選擇參考實驗室進行研究，參考實驗室應(yīng)具有中國合格評定國家認可委員會（CNAS）認可的相關(guān)檢測資質(zhì)。

1.3臨床評估方案

申請人應(yīng)在試驗前，從流行病學(xué)、統(tǒng)計學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計科學(xué)合理的臨床評估方案并遵照執(zhí)行。

如選擇與境內(nèi)已上市同類產(chǎn)品進行比較研究試驗途徑，試驗方案中還應(yīng)明確兩種試劑檢測結(jié)果不一致的判定依據(jù)，以及結(jié)果不一致樣本復(fù)核的方法。

1.4試驗方法

試驗方法的建立可參考相關(guān)方法學(xué)比對的指導(dǎo)原則（如：《體外診斷試劑分析性能評估（準確度-方法學(xué)比對）技術(shù)審查指導(dǎo)原則》），并重點關(guān)注以下內(nèi)容：

1.4.1樣本要求

1.4.1.1選擇涵蓋預(yù)期用途和干擾因素的樣本進行評價研究，充分考慮試驗人群選擇、疾病選擇等內(nèi)容，應(yīng)考慮到年齡、性別的差異，盡量覆蓋各類適用人群。樣本應(yīng)能夠充分評價產(chǎn)品臨床使用的安全性、有效性。

1.4.1.2樣本含量應(yīng)采用合理的統(tǒng)計學(xué)方法進行計算，應(yīng)符合統(tǒng)計學(xué)要求。樣本濃度應(yīng)覆蓋待評價試劑檢測范圍，盡可能均勻分布。

可選擇總樣本量不少于40例并分別采用待評價試劑和對比試劑/參考方法進行雙份測定的方式，其中參考區(qū)間以外樣本應(yīng)不少于50%，亦可選擇總樣本量不少于100例并分別采用待評價試劑和對比試劑/參考方法進行單次測定的方式。樣本的測定值應(yīng)在測量范圍內(nèi)。

試驗前應(yīng)設(shè)定臨床評價性能指標的可接受標準，如果比較研究試驗結(jié)果無法達到預(yù)設(shè)標準，則應(yīng)適當擴大樣本量進行評價。

1.4.1.3應(yīng)注重醫(yī)學(xué)決定水平量值附近樣本的選擇，并涵蓋檢測范圍。因腦利鈉肽（BNP）/氨基末端腦利鈉肽前體（NT-proBNP）檢測試劑產(chǎn)品受年齡、性別等多生理學(xué)因素的影響，建議進行分層統(tǒng)計，申請人應(yīng)結(jié)合實際情況選擇適當?shù)臉颖玖窟M行充分的臨床評價。

1.4.1.4應(yīng)明確臨床樣本的采集要求。

應(yīng)明確抗凝劑的要求、存貯條件、可否凍融、干擾物質(zhì)的影響等要求及避免使用的樣本。試驗中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。如無法避免使用貯存樣本時，注明貯存條件及時間，在數(shù)據(jù)分析時應(yīng)考慮其影響。

BNP檢測項目應(yīng)在其說明書聲稱的檢測時間內(nèi)完成檢測。

1.4.1.5評價用的樣本類型應(yīng)與注冊申請保持一致。對于具有可比性的不同樣本類型，如血清和血漿樣本，血漿和全血樣本可在分析性能評估中對樣本適用性進行研究，或在臨床評價中對每種樣本類型分別進行符合統(tǒng)計學(xué)意義數(shù)量的評估。

1.4.2試驗要點

1.4.2.1在試驗操作的過程中應(yīng)采用盲法。待評價試劑和對比試劑/參考方法應(yīng)平行操作，整個試驗應(yīng)有內(nèi)部質(zhì)量控制。

1.4.2.2建議本產(chǎn)品試驗檢測周期至少5天，以客觀反映實際情況。

1.4.2.3擴大樣本量和延長試驗時間將提高試驗的可靠性，申請人應(yīng)選擇適當?shù)臉颖玖窟M行充分的臨床評價。

1.4.3數(shù)據(jù)收集和處理

1.4.3.1應(yīng)首先進行離群值觀察，離群值的個數(shù)不得超過限值。若未超限，可刪除離群值后進行分析；若超出限值，則需合理分析原因并考慮糾正措施，必要時重新收集樣本進行分析。離群值分析和處理方法應(yīng)有依據(jù)。

申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點選擇合適的統(tǒng)計學(xué)方法，建議進行相關(guān)性分析，給出相關(guān)系數(shù)，進行回歸分析給出回歸方程和試驗數(shù)據(jù)的散點圖，并對相關(guān)系數(shù)和回歸方程的斜率進行顯著性分析。結(jié)合試驗數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布情況，選擇合理的統(tǒng)計學(xué)方法進行分析，統(tǒng)計結(jié)果應(yīng)能證實待評價試劑相對于對比試劑/參考方法檢測結(jié)果無明顯偏差或偏差在允許誤差范圍內(nèi)。另外，在臨床評估方案中應(yīng)明確統(tǒng)計檢驗假設(shè)。

具體數(shù)據(jù)分析方法如下：

用回歸分析驗證兩種試劑結(jié)果的相關(guān)性，以y=a+bx和R²的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是待評價試劑結(jié)果，x是對比試劑結(jié)果，b是方程斜率，a是y軸截距，R²是決定系數(shù)，同時應(yīng)給出b的95%（或99%）置信區(qū)間，定量值結(jié)果應(yīng)無統(tǒng)計學(xué)差異。

建議給出待評價試劑對比試劑之間的差值（偏差）及比值（偏差）散點圖。

如產(chǎn)品適用不同的具有可比性的樣本類型，如選擇在臨床評價中對每種樣本類型分別進行評估，則考慮到對不同樣本類型的檢測結(jié)果可能存在一定差異，故建議對不同樣本類型分別進行統(tǒng)計分析，以對待評價試劑的臨床性能進行綜合分析。

1.5臨床評價報告

臨床評價報告應(yīng)對試驗設(shè)計、試驗實施情況和數(shù)據(jù)分析方法等進行清晰的描述。應(yīng)至少包括如下內(nèi)容：

1.5.1基本信息，如產(chǎn)品名稱、申請人名稱及聯(lián)系方式、試驗時間及地點等。

1.5.2試驗設(shè)計，詳細說明對比試劑/方法選擇、樣本入組和排除標準、樣本量要求、設(shè)盲要求、統(tǒng)計分析方法的選擇等內(nèi)容。

1.5.3試驗實施情況，具體包括：

1.5.3.1樣本選擇情況，包括例數(shù)、樣本分布等。樣本含量應(yīng)詳細說明計算方法及依據(jù)。

1.5.3.2臨床評價所用產(chǎn)品信息，如評價用試劑、對比試劑/方法、配合使用的其他試劑/儀器的產(chǎn)品名稱、生產(chǎn)企業(yè)、規(guī)格/型號、批號等。

1.5.3.3實驗過程描述。

1.5.3.4試驗管理，包括參加人員、質(zhì)量控制情況、數(shù)據(jù)管理、出現(xiàn)的問題及處理措施等。

1.5.3.5數(shù)據(jù)分析及評價結(jié)果總結(jié)，根據(jù)確定的統(tǒng)計方法對檢測數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，對產(chǎn)品的臨床性能進行合理評價。

1.5.3.6評價數(shù)據(jù)表

應(yīng)以附件形式對入組的樣本情況進行匯總描述，應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：可溯源樣本編號、樣本基本信息、樣本類型、評價用試劑和對比試劑/方法檢測結(jié)果、樣本臨床背景信息或臨床診斷信息（如適用）等。

1.5.3.7評價報告應(yīng)由申請人/代理人簽章。

1.6其他評價資料

除以上臨床評價報告外，對擬申報產(chǎn)品臨床性能進行評價的相關(guān)文獻，可作為補充臨床評價資料提交。應(yīng)參照《醫(yī)療器械臨床評價技術(shù)指導(dǎo)原則》的文獻檢索要求進行文獻的檢索、篩選和分析。

2.臨床試驗途徑

臨床試驗的開展、方案的制定以及報告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求。

（八）產(chǎn)品風(fēng)險分析資料

主要參考YY/T0316—2016《醫(yī)療器械 風(fēng)險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》。風(fēng)險管理活動要貫穿產(chǎn)品設(shè)計、生產(chǎn)、上市后使用及產(chǎn)品處理的整個生命周期。要體現(xiàn)申請人風(fēng)險管理活動計劃的完整性，尤其上市管理的風(fēng)險分析與評價過程。對于上市前風(fēng)險管理中尚未認知的風(fēng)險，應(yīng)在上市后開展信息收集，一旦發(fā)現(xiàn)異常及時進行風(fēng)險評價，采取控制措施，更新風(fēng)險管理文件。

腦利鈉肽/氨基末端腦利鈉肽前體檢測試劑風(fēng)險分析應(yīng)參考YY/T0316—2016行業(yè)標準相關(guān)要求，逐一進行回答，也可以用列表的方式列示。剩余風(fēng)險分析時，一定要確認逐一采取風(fēng)險控制措施后，是否會引入或造成更大的風(fēng)險，只有新引入風(fēng)險能轉(zhuǎn)化為可接受風(fēng)險，方能認為風(fēng)險受控。腦利鈉肽/氨基末端腦利鈉肽前體檢測試劑必須進行風(fēng)險與受益分析，受益大于風(fēng)險時方可接受。

提供腦利鈉肽/氨基末端腦利鈉肽前體檢測試劑產(chǎn)品上市前風(fēng)險管理報告，此報告旨在說明并承諾：

—風(fēng)險管理計劃已被正確地實施。

—綜合剩余風(fēng)險是可接受的。

—已有恰當方法獲得與申請人申報的腦利鈉肽/氨基末端腦利鈉肽前體檢測試劑產(chǎn)品相關(guān)和出廠后流通與臨床應(yīng)用的信息。

應(yīng)隨風(fēng)險管理報告一并附上包括風(fēng)險分析、風(fēng)險評價、風(fēng)險控制概述管理資料。至少應(yīng)包括：

—產(chǎn)品安全特征清單。

—產(chǎn)品可預(yù)見危害及分析清單（說明危害、可預(yù)見事件序列、危害處境和可能發(fā)生的損害之間的關(guān)系）。

—風(fēng)險評價、風(fēng)險控制措施以及剩余風(fēng)險評價匯報表。

對于風(fēng)險分析和管理概述，應(yīng)包括一份風(fēng)險總結(jié)，以及如何將風(fēng)險控制在可接受程度的內(nèi)容。從預(yù)期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關(guān)的特征、已知和可預(yù)見的危害等方面，對產(chǎn)品進行全面分析并闡述相應(yīng)的防范措施。

1.風(fēng)險分析方法

1.1在對風(fēng)險的判定及分析中，要考慮合理的可預(yù)見的情況，包括：正常使用條件下和非正常使用條件下。

1.2風(fēng)險判定及分析應(yīng)包括：對于患者的危害、對于操作者的危害和對于環(huán)境的危害。

1.3風(fēng)險形成的初始原因應(yīng)包括：人為因素，產(chǎn)品組成成分的危害，原材料危害，綜合危害，環(huán)境條件。

1.4風(fēng)險判定及分析考慮的問題包括：腦利鈉肽/氨基末端腦利鈉肽前體檢測試劑原材料生物學(xué)危害；產(chǎn)品質(zhì)量是否會導(dǎo)致使用中出現(xiàn)不正常結(jié)果；操作信息，包括警示性語言、注意事項以及使用方法的準確性；使用過程可能存在的危害等。

2.風(fēng)險分析清單

腦利鈉肽/氨基末端腦利鈉肽前體檢測試劑產(chǎn)品的風(fēng)險管理報告應(yīng)符合YY/T 0316—2016的有關(guān)要求，審查要點包括：

2.1產(chǎn)品定量分析是否準確（依據(jù)YY/T 0316—2016 附錄C）；

2.2危害分析是否全面（依據(jù)YY/T 0316—2016附錄H）；

2.3風(fēng)險可接收準則，降低風(fēng)險的措施及采取措施后風(fēng)險的可接收程度，是否有新的風(fēng)險產(chǎn)生。

根據(jù)YY/T 0316—2016附錄H對該產(chǎn)品已知或可預(yù)見的風(fēng)險進行判定，腦利鈉肽/氨基末端腦利鈉肽前體檢測試劑產(chǎn)品在進行風(fēng)險分析時至少應(yīng)包括對以下主要危害的風(fēng)險分析，申請人還應(yīng)根據(jù)自身產(chǎn)品特點確定其他危害。針對產(chǎn)品的各項風(fēng)險，申請人應(yīng)采取應(yīng)對措施，確保風(fēng)險降到可接受的程度。

表1  產(chǎn)品的主要危害（舉例）